1．1．4 N蛋白
编码N蛋白的基因长l．7×103bp，翻译产物为382个氨基酸残基，分子量约为45 ku。N蛋白是病毒粒子内部的一种蛋白质，主要构成病毒的核蛋白，它包绕基因组RNA，呈螺旋式结构，直径9～16 nm，使其易掺入病毒中，体外复制时，N蛋白制备的抗血清能抑制90％的基因RNA的合成，证明它在RNA复制加工过程中起重要作用。Motokawa对TGEV的N蛋白进行了测序，发现其氨基酸残基缠绕在一起，C一端呈酸性，丝氨酸残基酸总数的8％-10％，缠绕程度与丝氨酸的专一磷酰化有关。N蛋白含有蛋白水解位点，通过蛋白水解作用和去磷酸化作用，对病毒粒子的装配起重要作用。N基因可诱导机体产生细胞免疫，而由于核蛋白的高度保守性，对核蛋白作为诊断抗原的研究也受到人们的广泛重视。
Pulford等(1991)将TGEV核衣壳蛋白基因克隆到痘病毒插入载体。在痘病毒P7．5K启动子作用下，痘病毒WR株与插入载体在体内进行同源重组产生重组痘病毒，在重组痘病毒中表达的核衣壳蛋白，其羧基端产物的分子量为47 ku，且易降解。间接荧光试验表明N蛋白仅位于细胞质中，TGEV或重组疫苗病毒感染细胞的裂解产物可免疫沉淀的特异TGEV抗原，但没有中和活性。Liu C等(2001)将N基因全序列的cDNA插入哺乳动物表达载体(pcDNA3．1)中构建了重组质粒(pcDNA／N)，将构建的载体免疫鼠后，能诱导鼠体产生针对传染性胃肠炎病毒N蛋白的体液免疫反应和细胞介导的免疫反应，但所产生的抗体没有中和活性。
1．2非结构蛋白组成及其功能
由于对TGEV@结构蛋白的认识还很少，其相应的特性和生物学作用尚不完全清楚。根据目前对TGEV基因组RNA的序列分析和复制过程中胞内亚基因mRNA种类和数量的确定，发现0RFl，mRNA3，mRNA7分别翻译了非结构蛋白质，其中mRNA7翻译的蛋白质为疏水蛋白。
1．2．1 0RFla；fNORFlb基因
由2个较大的开放阅读框ORFla和0RFlb，长约20 kb的基因，翻译1种或2种多肽蛋白，具有一个高效的核蛋白体(核糖体)移码活性，即编码病毒复制酶一转录酶。0RFla编码产物中有2个类木瓜蛋白酶区(Papain—like，PL)，一个类3C蛋白酶区(3C—like，3CL)并H--个类生长因子／受体区(growthfactor／receiptor一1ike，GFL)。在3CL两侧各有一个明显的疏水区。ORFlb编码产物中有聚合酶(P01)区、金属离子结合区(MIB)年N解旋酶(Hel)区。在伯尔尼病毒、动脉炎病毒及TGEV、MHV(鼠肝类病毒)、IBV(鸡传染性支气管炎病毒)，HCV229E中，Pol，MIB，Hel以及0RFlb多肽的羧基端都具有明显的保守性。在ORFl产物中，存在14个3CL切割位点，它们集中于0RFla多肽羧基端(7个)年NORFlb多肽(5个)，其中10个位点含有LQA／S三联子。在第1个PL区中存在一个3CL切割位点(LQA)，可能是对该蛋白酶活性进行调控(灭活)的靶子。
1．2．2基因7
基因7位于病毒基因组的3’端。在TGEV感染细胞中检测到了ORF7编码9．1 ku的疏水蛋白，它可与mRNA4翻译的合成肽血清发生反应，是属于冠状病毒族特异性基因。当病毒感染细胞并与细胞吸附的时候，该蛋白分子定位于内质网和细胞外膜，促进其插入细胞膜内。该蛋白分子最后定位于细胞核，共作用可能是为了TGEV在动物体内克服宿主抵抗或影响细胞的分裂周期。
据Ortego J等(2003)报道，剔除基因7的病毒重组体(rTGEV—A7)能恢复其cDNA活性，在细胞培养中的复制没有影响，值得注意的是，活体接种rTGEV—A7感染实验中，感染仔猪后的存活率为l00％，病毒在肺部和肠道内的复制、毒力等都有额外的减少，毒力降低，表明基因7是一个非必需基因，同时也表明TGEV基因7影响病毒的致病性。因此缺失非必需基因，如基因7，将会有利于学习毒力减弱的分子基础和提供一个有吸引力的方法去繁殖弱毒rTGEVs，它将是一个很有潜力的病毒载体。鉴于基因7的特点，还可以利用反义核酸技术筛选制备抗猪传染性胃肠炎病毒反义寡核苷酸，应用于该疾病的治疗以及研究该基因的功能。
1．2．3基因3
mRNA3有2个ORF，UlIORF3a(71个密码子)和ORF3b(254个密码子)。在体外翻译时，0RF3b产生了一个27．7 ku的多肽，但是在感染细胞内还未检测到mRNA3a的翻译产物。ORF3a至少不是病毒复制所必需的，因为TGEV变异株及PRCV都缺失它，但这种缺失可能影响病毒毒力和组织嗜性。除S基因外，mRNA3翻译的多肽也可能参与了病毒的吸附细胞的过程。
TGEV可在肠道和呼吸道中复制，并引起肠道疾病，而猪呼吸道冠状病毒(PRCV)在呼吸道中复制，却不能在肠道中复制。Paul PS等(1997)观察到致病性不同的PRCV分离株的一个特点就是在基因3上有差异：在2种强毒PRCV分离株中基因3保持不变，而在2个弱毒TGEV毒株中的基因3有变异。对TGEV也有相似的报道，产生小噬斑的非致病性突变体的基因3有核酸缺失，因而推测基因3可能是冠状病毒在猪体内的毒力和体外复制的重要决定因素。0’Connor JB等(2000)发现TGEV基因3b编码一个功能未知的、分子量为27．7 ku的非结构多肽，此多肽在体外翻译时经糖基化后成为31 ku的整合膜蛋白。在TGEV强毒Miller株中，ORF3b在mRNA3—1的5’端，认为其在5’端帽子结构依赖性的核糖体进入处开始翻译。而其他3株TGEV株：强毒英国F8772／70株、台湾TFl株和弱毒Purdue一116株都不存在mRNA3-1，因而推测ORF3b可能是由mRNAI和mRNA2表达。
2 TGE疫苗研究进展
TGE具有高度传染性，猪场一旦暴发此病，而造成出生2周龄以内仔猪近乎100％死亡，损失十分严重，而初乳中的IgA能在肠道中杀死病毒，抵抗感染，故特异性预防主要是针对仔猪的主动免疫和被动免疫。促使哺乳仔猪和断奶仔猪(尤其是刚断奶的)产生主动免疫对于控制本病的流行非常重要。在美国，TGEV弱毒疫苗和灭活疫苗，可以通过口服和腹腔内注射对初生仔猪进行预防接种。初步研究表明，血清学阳性仔猪接种后能产生较强的保护力，即使血清抗体水平并未提高。然而，衡量TGEV对日龄较大的仔猪的影响是困难的，原因在于随着日龄的提高，仔猪对TGEV的抵抗力也有所增强。研究还发现，仔猪接种疫苗后，母源抗体发生下降，甚至完全抑制主动抗体的产生。有人给自然感染母猪哺乳的仔猪接种TGEV弱毒苗，结果被动免疫抗体和肠道抗体都被干扰。在开发TGEV疫苗时，如何捉高疫苗刺激母猪肠道IgA的应答能力，同时又做到疫苗毒株已经完全致弱或无感染力，以确保初生仔猪不发病。这是摆在疫苗研究人员面前的一大难题。自从1946年发现TGEV以来，人们就开始研究其免疫控制技术，这期间大致经历了人工感染强毒、灭活苗、弱毒活疫苗和基因工程疫苗4个阶段。随着对TGEV基因组结构及其功能上的认识不断深入，人们采用基因工程疫苗来预防TGE的研究越来越多。而由于S蛋白是TGEV的主要抗原蛋白，近年来利用基因重组技术表达s蛋白，从而在动物体内产生免疫抗体，成为TGEV疫苗研究的热点。
2．1强毒苗
为控制本病的发生，最初国外采用病死猪的排泄物或内脏(含有强毒)掺入饲料喂母猪，待母猪发病耐过后，可保护所产的仔猪，只有强毒TGEV才能诱导肠淋巴组织产生大量IgA分泌细胞。即在母猪分娩前2～3N，用病死仔猪的肠内容物稀释混入饲料内，对母猪进行口服感染，可以使仔猪得到明显保护。但该种方法母猪的粪便易造成环境污染，使该病反复发作，故不提倡。我国也曾用过此法，但不利于对病原的消灭和控制，反而扩大传染面。自疫苗问世后，国内外均已废止此种方法，用疫苗取代了强毒感染免疫的办法，有效地控制了猪传染性胃肠炎的发生。
2．2灭活疫苗
灭活疫苗采用非肠道途径注射，妊娠母猪肌肉注射，哺乳仔猪或断奶仔猪腹腔注射免疫。安全性好，免疫妊娠母猪后，产生的母源抗体对仔猪有较好的保护性。但灭活苗对肠黏膜表层下IgA浆膜细胞刺激很小，肠道局部的IgA产生较少，因而灭活苗主动免疫的效力不如弱毒疫苗。
2．3弱毒活疫苗
TGEV弱毒疫苗用于口服，妊娠母猪免疫后可通过哺乳使仔猪产生被动免疫，也允许哺乳仔猪或断奶仔猪的口服免疫而产生主动免疫。弱毒苗也具有激发肠内SIgA应答的能力，通常母猪经口或鼻腔接种TGEV弱毒疫苗不会产生理想的免疫效果，原因是多数弱毒株在母猪肠道的浅表部位复制，并且生长不够好，使深层的肠IgA浆细胞产生极有限的抗原刺激，造成母乳中IgA抗体分泌量很少。TGEV弱毒株(疫苗株)或PRCV诱导的IgA抗体分泌细胞明显少。由此表明，仔猪出生时对体液和黏膜抗体的产生具有免疫活性，但在肠道内抗体应答需要成熟时间，才能达到成年猪的水平。弱毒疫苗免疫失败的主要原因是所产生的分泌性免疫球蛋白(SIgA)水平达不到自然感染TGEV时所产生的水平，并且可能出现毒力返强等不安全现象。非肠道输入的灭活疫苗不产生SIgA抗体，细胞介异免疫反应弱而且维持时间短。尽管这些疫苗不能完全防止TGEV流行，但研究数据表明这些疫苗可以通过刺激对血清和乳汁内的病毒的免疫记忆反应产生抗体而起到一定的预防TGEV流行的效果。所以，TGEV滴度的提高对于TGEV灭活疫苗的生产工艺变得至关重要，病毒滴度高，即意味着有活性的病毒粒子就更多，疫苗中抗原量也越高，免疫猪后经刺激产生的抗体也就越多，越能产生免疫保护作用。国外已培养出多种弱毒疫苗，如德国的Bl一30疫苗株，美国的TGE-Vac株，匈牙利的CKP株，日本的T0163株等。国内的上海农科院畜牧所、哈尔滨兽医研究所等几家研究单位也较早进行了TGEV疫苗的研究工作，如投入应用的华毒疫苗株。 责任编辑：
