2．4用猪呼吸道冠状病毒(PRCV)疫苗预防TGEV
随着PRCV在欧洲猪群中的广泛传播，流行国家中TGEV的发病率和危害程度已明显下降。说明猪感染PRCV后可对TGEV产生一定的免疫力。大量研究证实，母猪感染PRCV与仔猪对TGEV的被动免疫保护之间具有某种联系。怀孕母猪实验感染或重复感染PRCV后，其哺乳仔猪对TGEV具有相应的水平不同的保护力。值得注意的是，母猪在怀孕后期受到PRCV感染时，乳猪病死率最低(范围0-27％，平均为14％)，而母乳IgAf[1IgG抗体滴度最高。自然感染PRCV的母猪在怀孕期间再次感染PRCV，母乳中就有分泌性IgA TGEV抗体，对仔猪产生高的保护力(6窝仔猪中3窝的病死率为0～12．5％)。这与其他研究结果相一致。
除了母乳中IgA抗体水平外，PRCV诱生对TGEV被动免疫的特点是母猪对TGEV产生了主动免疫，防止了发病或无乳。感染PRCV母猪的乳猪腹泻减少，病死率较低，即使仔猪被TGEV感染发病，母猪也不会发病或出现无乳。
目前，尚不了解感染PRCV母猪的乳中IgA抗体水平不稳定的原因，也不了解这种抗体与TGEV被动免疫保护之间的相关性。首次感染PRCV后，只有30％母猪的乳中产生IgA抗体，而再次感染后，比率上升到84％。这些研究结果与Sestak等(1996)的报道相吻合，他们发现，母猪在连续2次怀孕期内多次感染PRCV，母乳中IgA(和lgG)TGEV抗体滴度明显提高。母猪首次感染PRCV后，乳中IgA抗体应答不稳定，这可能与支气管相关淋巴组织(BALT)、肠相关淋巴组织(GALT)*N肠系膜淋巴结中病毒特异的IgA分泌细胞数量少有关。可能有必要让母猪重复感染PRCV，以提高lgA分泌细胞的数量，和提高BALT与乳腺间sIgA免疫连接的效果。血清阴性猪经口鼻接种PRCV后，其支气管内可发现大量的病毒特异性IgG分泌细胞。经TGEV攻毒，感染过PRCV猪的支气管内IgG分泌细胞(*[1IgA分泌细胞)增多。由于母猪感染了一些能在呼吸道复制的病毒后，如TGEV弱毒株和伪狂犬病毒，其乳中主要存在IgG抗体，因此可以相信，母猪BALT和乳腺之间存在着IgG免疫连接，或者，BALT刺激生成血清IgG抗体，最后渗入母乳。
在感染TGEV或PRCV后，乳中生成的IgA抗体水于除了量的不同外，人们还研究了母猪感染后，诱生的IgA母乳抗体所识别的病毒抗原决定簇存在潜在差异。对于TGEV感染的母猪，抗原亚位点A是IgA的最佳诱导物，其次是抗原亚位点D；而在PRCV感染后，抗原位点D和亚位点Ab是免疫显性的。因此，可以提出这样一个结论，至少能识别抗原位点A和D的IgA，在体内提供良好保护；而识别一种抗原位点的任何免疫球蛋白(Ig)只能中和细胞培养的病毒。
显然，有必要进行补充性研究，以真正了解猪先前感染PRCV后，它所产生的对TGEV的主动和被动免疫的水平和机制，尤其要阐明猪感染PRCV后产生IgA抗体的机制。假设BALT和乳腺之间的免疫连接是存在的，但是没有像肠一乳腺连接那样有效地诱导乳中生成IgA，为什么只有一些PRCV感染母猪才产生IgA抗体，在乳猪受TGEV肠道感染时发挥保护作用。
2．5基因工程疫苗
由于在TGEV编码的4种结构蛋白中，只有s蛋白携带主要的B淋巴细胞抗原决定簇，是唯一能够诱导产生中和抗体和提供免疫保护的结构蛋白，所以对编码S蛋白的S基因一直是基因工程疫苗研究的重点，目前基于此所进行的疾病预防与基因工程疫苗的研制等方面的研究已逐渐深入。
2．5．1亚单位疫苗
亚单位疫苗中含有特殊的高分子，它可以诱导产生抵抗病原体的免疫保护作用，从而具有良好的免疫效果。由于猪传染性胃肠炎冠状病毒的s蛋白具有良好的免疫原性和在肠道内较强的抗降解能力，因此它成为发展哺乳动物肠道病原体口服疫苗非常好的模型。
Garwes等给怀孕母猪乳腺内注射S蛋白或亚单位粒子时发现，虽然注射S蛋白的母猪血清和初乳中出现了中和抗体IgG。然而对于仔猪的保护性比较差。Shoup等用杆状病毒为载体在昆虫细胞系表达S基因，提取蛋白制成亚单位疫苗，对妊娠母猪免疫弱毒苗后，使用此亚单位疫苗进行加强免疫，可显著提高母猪血清和初乳的抗体水平，其对仔猪的保护率比弱毒苗两次免疫还高4％，但S蛋白亚单位苗单独免疫效果不佳。
Godet等将S基因插入杆状病毒转染质粒pVL941中，与杆状病毒DNA共转染Sf9细胞，经空斑筛选后获得了高效表达的重组杆状病毒，表达产物与弗氏完全佐剂配制成疫苗，免疫35日龄路易斯鼠，l2 d后，鼠血清中和试验的效价达1：2 500。
Tuboly等分别克隆全长S基因及其抗原位点片段并在杆状病毒载体中表达，表达产物免疫乳猪后，发现s基因中5’端长度为2．2 kb的主要抗原位点片段的重组病毒诱导的病毒中和抗体与全长S蛋白诱导的抗体相当。
2．5．2重组活载体疫苗
重组活载体疫苗是用基因工程技术将病毒或细菌(常为疫苗弱毒株)构建成一个载体(或称外源基因携带者)，把外源基因(包括重组多肽、肽链抗原位点等)插入其中使之表达的活疫苗。使用该类疫苗免疫动物时，其向宿主免疫系统提交免疫原性蛋白的方式与自然感染时的真实情况很接近，可诱导产生的免疫比较广泛，它具有活疫苗的免疫效力高、成本低及灭活疫苗的安全性好等优点。活载体疫苗在刺激肠道免疫而诱发抗TGEV的保护是非常重要的，因此人们尝试用活病毒做载体表达TGEV。Nagy将含5’端主要抗原位点片段插入到5型腺病毒的E3区，构建了重组病毒。并将重组病毒经口免疫猪的抗体反应和病毒脱落情况进行检测，结果表明表达s基因的病毒能诱导产生抗TGEV矛N5型腺病毒的特异性抗体，而且在免疫猪的小肠和肺部也检测到了TGEV特异性的分泌型IgA。
Tuboly等报道，在杆状病毒中表达的含有4个抗原位点的重组S基因诱发的病毒中和抗体滴度与完整的S基因诱导相同，缺乏A位点或潜在的受体结合位点与D位点的重组蛋白产生VN抗体水平比不上由s全基因诱导的VN抗体。Tuboly等(2001)用同源重组的方法构建了4个能表达TGEV全长S基因的重组腺病毒。它们在胞内感染后表达的产物均包含s蛋白的抗原位点B、C并且有较高的表达水平。经放射免疫测定，结果发现重组体能诱导仓鼠乳汁中产生中和抗体，同时可诱导猪产生中和抗体，该抗体(免疫猪的血清)可保护仔猪降低对TGEV的感染性或不表现临床症状。
Shoup等(1997)将TGEV的s基因插入杆状病毒转染到质粒PVL941的启动子下游附近，与经酶切线性化的杆状病毒DNA共同转染sf9细胞，经空斑筛选获得高效表达的重组杆状病毒，经SDS-PAGEfNWestem-bloth[实，表达产物的分子量为175 ku。该表达产物与弗氏完全佐剂配制的抗原免疫路易斯大鼠，能够产生高效价的中和抗体。
Scott构建了S基因重组腺病毒载体，用该重组腺病毒免疫仓鼠，采其抗血清与致死剂量的TGEV混合后接种刚出生仔猪，可大部分或全部阻止仔猪发病。Britton等将TGEV英国分离株s基因的cDNA插入到痘苗病毒胸苷激酶基因中，重组s蛋白可在质膜上表达。并且S蛋白的单克隆抗体能与该重组s蛋白反应。Izeta等采用重组小基因组表达TGEV S基因，并与作为辅助病毒呼吸道TGEV毒株结合，创造一个TGEV*H呼吸道毒株的嵌合病毒。如果能将其充分致弱，这种嵌合病毒可能被认为是一种新的TGEV疫苗候选毒株。 责任编辑：
