| 核心提示：猪水肿病，又叫大肠杆菌毒血症、浮肿病、胃水肿。是小猪一种急性、致死性的疾病，其特征为胃壁和其它某些部位发生水肿。近年来，许多猪场屡次出现疑似该病的病例，本文对疑似水肿病的病猪采集了病料，进行了病原分离鉴定和防治试验。 |
猪水肿病（ＥＤ）是断奶后仔猪多发的一种急性肠毒血症。以突然发病、头部水肿、共济失调、惊厥和麻痹为主要症状，剖检变化以胃壁和肠系膜显著水肿为主要特征。该病发病率约１０％～１５％，病死率达９０％，给养猪业造成很大损失。
１ 实验材料与实验方法
１．１ 实验材料
病料为来自不同猪场的３０头疑似仔猪水肿病病猪，无菌采集病猪肠系膜淋巴结、肝脏、脾脏；自制的普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美兰琼脂平板、鲜血琼脂平板、各种生化培养基；购自中国兽药监察所的大肠杆菌标准抗“Ｏ”血清。
１．２ 病原菌分离鉴定
１．２．１ 细菌分离
无菌取肠系膜淋巴结、肝、脾，划线接种于麦康凯琼脂平板、伊红美兰琼脂平板和鲜血琼脂平板，３７℃培养２４ｈ后观察结果。
１．２．２ 生化试验
将分离菌株分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖反应管和葡萄糖磷酸盐蛋白胨水培养基（２管）、蛋白胨水培养基、枸橼酸盐培养基、尿素培养基３７℃反应２４ｈ，直接观察结果或加入相关试剂观察结果。
１．２．３ 分离菌株的致病性试验
取鲜血琼脂平板上溶血菌落用生理盐水溶解，麦氏比浊测得其浓度为１０亿个／ｍｌ，用生理盐水稀释为１亿个／ｍｌ，供攻毒用。实验组小白鼠１０只，每只腹腔注射０．２ ｍｌ菌液，对照组小白鼠１０只，每只腹腔注射０．２ ｍｌ生理盐水。接种后观察７２ｈ，记录小鼠变化情况，如小鼠发生死亡，从其心、肝、脾等脏器分离细菌。
１．２．４ 分离菌株的血清型鉴定
将被检细菌１８ｈ的固体培养物用生理盐水洗涤，离心２次，每次离心１０ ｍｉｎ（４０００ ｒ／ｍｉｎ），将沉淀细菌稀释为１０亿个／ｍｌ的菌液，用水煮沸２．５ ｈ，破坏其荚膜抗原，应用微量凝集反应，用大肠杆菌标准抗“Ｏ”血清对所分离到的大肠杆菌进行血清型鉴定。
１．３ 药敏试验
将分离到的３个优势血清型菌株分别用生理盐水稀释，均匀涂布于普通琼脂平板上，贴上硫酸丁胺卡那霉素、庆大霉素、硫酸新霉素、先锋霉素、环丙沙星、氟哌酸、卡那霉素、青霉素、四环素９种药敏纸片，３７℃培养１８ ｈ。
１．４ 多价油乳剂灭活苗的制作
将分离到的优势血清型菌株分别接种于肉汤内，３７℃培养１８ ｈ作为种子液。然后再分别接种于普通琼脂平板，３７℃培养１８ ｈ，用灭菌生理盐水洗菌苔并混合，按常规方法计数，使活菌数达８×１０９个／ｍｌ以上，０．３％甲醛３７℃灭活２４ ｈ，加入灭菌吐温－８０作水相，９４％的１０号白油与６％的司本－８０混合后，加入２％的硬脂酸铝，高压灭菌后作为油相，将油相与水相按２．５∶１比例混合，高速搅拌３～５ ｍｉｎ，分装、封口，并按常规方法进行无菌检验、安全检验和效力检验。
１．５ 高免血清的制备
选择５０ ｋｇ左右营养状况良好的健康猪５头，经隔离观察一周确认健康后，用制做的多价油乳灭活苗免疫猪。第一次免疫按１０ ｍｌ／头，在颈部分两点深部肌肉注射，７天后进行第二次免疫，１５ ｍｌ／头颈部分点肌肉注射，再过７天后进行第三次免疫，２０ ｍｌ／头颈部分点肌肉注射，第三次免疫后２０天，对试验猪无菌采血。所采血液用离心机２５００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，吸取血清，用试管凝集试验测定血清效价，确定效价值达１∶５１２以上，凝集抗原含菌量达１０亿个／ｍｌ之后，加入０．５％石炭酸和适量抗菌素，混匀、分装、冷藏，并按常规方法进行无菌检验、安全检验和效力检验。
１．６ 猪水肿病的预防和治疗试验
１．６．１ 预防试验
选择水肿病发病严重猪场的１０日龄的仔猪４００头分为４组。第１组在仔猪１５日龄时接种猪水肿病多价油乳剂灭活菌，剂量为１ｍｌ／头；第２组在断奶仔猪饲料中加入有益活菌制剂益生素，连用一周；第３组以上两种方法同时采用；第４组不采取任何措施作为对照组。
１．６．２ 治疗试验
对发生水肿病的病猪，采取以下３种方式治疗：①第１组５０头，按１０ ｍｇ／ｋｇ体重肌肉注射硫酸丁胺卡那霉素，一天两次，连用３天，同时配合使用地塞米松（５ ｍｇ／ｍｌ）０．５～１ ｍｌ／头，维生素Ｃ（５００ ｍｇ／２ ｍｌ）０．５～１ ｍｌ／头，维生素Ｂ１（１００ ｍｇ／２ ｍｌ）１～２ ｍｌ／头，肌注，每天２次，连用３天。②第２组５０头，按１ ｍｌ／ｋｇ体重肌肉注射猪水肿病高免血清，仅用１次，同时配合使用地塞米松（５ ｍｇ／ｍｌ）０．５～１ ｍｌ／头，维生素Ｃ（５００ ｍｇ／２ ｍｌ）０．５～１ ｍｌ／头，维生素Ｂ１（１００ ｍｇ／２ ｍｌ）１～２ ｍｌ／头，肌注，每天２次，连用３天。③第三组５０头，按１ ｍｌ／ｋｇ体重肌肉注射猪水肿病高免血清，仅用１次，同时配合使用硫酸丁胺卡那霉素１０ ｍｇ／ｋｇ，地塞米松（５ ｍｇ／ｍｌ）０．５～１ ｍｌ／头，维生素Ｃ（５００ ｍｇ／２ ｍｌ）０．５～１ ｍｌ／头，维生素Ｂ１（１００ ｍｇ／２ ｍｌ）１～２ ｍｌ／头，肌注，每天２次，连用３天。
２ 实验结果
２．１ 病原菌的分离鉴定
从３０份病料中分离到２１株疑似猪水肿病病原菌株，分离率达７０％，这些菌株在普通培养基上生长良好，形成圆而隆起、光滑、湿润、边缘不规则半透明无色菌落。麦康凯琼脂培养基上形成红色菌落，伊红美兰培养基上长出紫黑色带金属光泽的菌落，鲜血琼脂上呈β溶血。所分离的菌株革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。对２１株分离菌株进行生化试验，所有菌株能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖，甲基红试验、靛基质试验阳性，乙酰甲醇生成试验、枸橼酸盐利用试验、尿素分解试验阴性，均符合大肠杆菌的生化特点，证明所分离的菌株确为大肠杆菌。分离菌培养物接种小鼠后４８ｈ内，小鼠全部死亡，从死亡小鼠的心、肝、脾等脏器均分离出大肠杆菌，而注射灭菌生理盐水的小鼠没有异常反应。对分离到的２１株大肠杆菌进行血清型鉴定，结果６株为Ｏ１３９、５株为Ｏ８、４株为Ｏ１３８，Ｏ１４１、Ｏ１４９、Ｏ２各２株。
２．２ 药敏试验结果
在９种抗生素中，抑菌作用最强的是硫酸丁胺卡那霉素和先锋霉素，其次为硫酸新霉素、庆大霉素、卡那霉素、氟哌酸，对青霉素、四环素、环丙沙星不敏感。
２．３ 多价油乳剂灭活苗和高免血清研制结果
用分离的优势血清型菌株Ｏ１３９、Ｏ８、Ｏ１３８研制的多价油乳剂灭活苗，按常规方法进行无菌检验、安全检验和效力检验均合格，用多价油乳剂灭活苗研制的高免血清，按常规方法进行无菌检验、安全检验和效力检验均合格。
２．４ 猪水肿病预防和治疗试验结果。
用多价油乳剂灭活苗免疫仔猪，预防猪水肿病效果良好，而采取多价油乳剂灭活苗预防接种配合使用活菌制剂益生素，预防效果更佳。
血清的治愈率为６６％，明显高于使用硫酸丁胺卡那霉素的治愈率２２％，高免血清配合敏感抗生素的使用治疗效果最好，治愈率为７８％。
３ 讨论与小结
从疑似猪水肿病的３０份病料中分离到２１株大肠杆菌，经Ｏ血清型鉴定，６株为Ｏ１３９、５株为Ｏ８、４株为Ｏ１３８，Ｏ１４１、Ｏ１４９、Ｏ２各２株，其中Ｏ１３９、Ｏ８、Ｏ１３８为优势血清型。
仔猪水肿病是危害养猪业的一种常见疾病，临床上常出现盲目用药的情况，既花费了大量的资金，又不能很好地控制疫情。用分离的优势血清型菌株筛选出敏感药物并研制出多价油乳剂灭活苗和高免血清，用多价油乳剂灭活苗预防仔猪水肿病效果良好，而采取多价油乳剂灭活苗预防接种配合使用活菌制剂益生素，预防效果更佳。使用高免血清是治疗该病的有效方法，而使用高免血清配合敏感抗菌素的使用，治疗效果更佳。
责任编辑：陈静
