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血清学检测在传染病诊断与控制中的应用

时间:2008-06-23 来源:北京爱德元亨公司 作者:苗得园 点击:   网友评论  分享到微博

     在传染病的检测中,血清学检测是最为常用的方法。所谓血清学检测,通常是指在体外进行的抗原抗体反应,其基本原理就是利用抗原可与相应的抗体特异性结合的特性,利用已知的抗原来检查血清或其它样品如卵黄、牛奶中是否含有相应的抗体,并随着血清学技术的进一步应用,也逐渐建立了一些能够利用已知的抗体来捕捉相应抗原的血清学方法。
    将血清学试验用于疾病的诊断和控制是由Jones在1913年开创的,最早是将试管凝集试验用于鸡白痢的诊断,从此以后,许多血清学检测技术比如血凝抑制试验(HI)、琼脂扩散(AGID)、病毒中和试验(SN)等应运而生,在有效的畜群健康管理中发挥了重要的作用 。下面就将血清学检测的目的、原则以及血清学检测方法的选择进行阐述。
1 血清学检测的目的:
    在进行血清学检测之前,首先要明确血清学检测的目的,即为什么要进行血清学监测?怎样将血清学检测结果和种群的情况联系在一起?通常来说,血清学检测往往具有以下几个方面的作用:
    监测疫苗接种方案的效果: 如紧急免疫需要较大剂量的活苗进行,若追求较高的血清抗体可适当考虑灭活疫苗等。 由于疫苗品种繁多也会使养殖者陷入难于选择的境地,再者选用的疫苗是否质量可靠、免疫方式是否确凿有效、免疫程序是否合理也是常常困扰着他们,这时候,应用血清学检测方法来评估畜群免疫后的抗体水平无疑就提供了莫大的帮助。
    1.2    预测接种时间:在临床上,恰当的免疫接种时间往往是有效免疫的关键,目前,大家都能够认识到,在使用疫苗尤其是活苗的时候,一定要考虑在母源抗体(MDA)的影响,最可靠和可行的方法就是通过血清学检测方法来测定母源抗体的消长,确定免疫接种的最佳时机。据台湾用C株疫苗进行的研究表明,首次免疫接种时抗体的阳转率与HerdChek ELISA抗体的阻断率呈明显的负相关,即免疫前抗体水平越高(体现为阻断率的上升),免疫效果越差。当母源抗体的阻断率高于70%时,免疫很难奏效。
    1.3确定养殖场存在的问题:目前,由于集约化养殖程度的不断提高,疾病的感染压力越来越大,另外,由于混合感染、多重感染、非典型性病变的不断增多,新病原或新病原型/亚型不断出现,再者一些古老的疾病也出现新的流行特点,使得流行病学诊断和临床诊断越来越困难,疾病的确诊往往都是通过实验室的手段来实现。另外疾病一旦发生,诊断所需要的时间往往会与疾病所造成的损失直接相关,越快作出诊断就可以越早采取正确的应对措施,控制或减轻疾病的流行,这也需要一个有力的工具协助你早期检测到疾病,血清学检测大多都具有很好的方便性和快速性。另外许多病原的侵袭,对成年动物或抗体较高的畜群仅仅引起抗体的变化,在临床上并没有明显的临床症状,但是对幼畜或者抗体水平低下或不整齐的群体则有发病的危险,所以通过定期检测血清学的变化就可以做到防患于未然,及早发现问题,及早采取措施,起到一种预警的作用。
    1.4疾病诊断:虽然检测抗体的血清学方法可以成功地用于免疫评估,但对许多研究者来说,将血清学检测方法用于疾病的诊断往往是他们的初衷,在他们的努力下,也建立了一些直接检测抗原或能够区分野毒和免疫抗体的方法,如herdchek猪瘟抗原检测ELISA试剂盒、Chekit猪瘟抗原检测试剂盒等能够直接检测到猪瘟病毒的抗原成分,猪伪狂犬病病毒gI抗体检测试剂盒、Chekit口蹄疫3ABC抗体检测试剂盒等能够将免疫抗体和野毒抗体很好地区分。另外,虽然有一些方法既可以检测到免疫抗体和感染抗体,但由于多数情况下野毒抗体与免疫抗体往往在滴度或特性上存在区别差别,所以也可以提示养殖者是否存在野毒感染,如在使用Herdchek猪瘟抗体检测试剂盒来检测血清抗体时,研究者发现,将阻断率在70%以上的血清进一步稀释到40倍,免疫血清大多会呈现阴性结果,而多数人工感染猪只的血清则仍然呈现阳性结果。
     1.5根除方案:血清学检测手段用于疾病的根除在猪伪狂犬病的根除计划中的应用最为成功,美国、荷兰等许多国家都凭借这种能够区分免疫和野毒抗体的检测方法、通过极其类似的根除计划对本国的伪狂犬病进行了净化,而且都取得了很大的成功。对于一些流行不太严重或者传播不太迅速的疾病,如REA、淋巴白血病等疾病都可以考虑用剔除阳性个体的方法,利用良好的检测产品进行逐步净化。
 2 血清学检测的原则
    2.1 血清学监测采样原则:在对畜群进行血清学检测时,取样方法、取样时间和样本大小与疾病患病率一致,正确大小的样本可以可以提供良好的统计学内在价值,以用于制定种群健康情况处置策略。合适的样本大小可以通过检查群体内以往滴定数据获得最佳提示,一般来说,结果变异越大,样本应该越多,以代表整群状况。多数情况下,根据以往的实践和统计学经验,23以上的样本被认为是合理的(介于29和19份之间),在检测10-15%的流行的疾病时获得95%的可信度(或可能性)。对于检测慢性传播和低流行(〈5%〉的疾病需要检测样品的数量如表1所示。另外样品的质量对于检测结果也有着至关重要的影响,对ELISA试剂盒来讲,为获得最高的准确度,应避免应用高度溶血的样品(深红色)或严重脂血样品,血清样品在2-7ºC冷藏不可超过3-5天,或在 -20ºC冷冻不超过30 天,还要避免反复冻融,建议不超过3-5个循环。


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