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猪支原体肺炎微量问接血凝试验抗原

时间:2008-08-13 来源:猪病专业网 作者:康大夫 整理 点击:   网友评论  分享到微博


本抗原系用猪肺炎支原体Z、C株,接种适宜培养基培养,收获培养物,浓缩、裂解、致敏醛化绵羊红细胞后,经冷冻真空干燥制成。用于诊断猪支原体肺炎。
【性状】本品为棕色疏松团块,加PBS后能迅速溶解,不出现肉眼可见的凝块。

【作用与用途】用于诊断猪支原体肺炎的微量间接血凝试验。

【用法和判定】(1)用法a.首先用记号笔在72孔“V”型微量反应板的一边标明被检血清、阳性猪血清、阴性猪血清及抗原对照,各占一排孔。b.滴加稀释剂  用微量移液器每孔加0.025mL稀释剂。c.血清稀释使用微量稀释棒先在稀释液中预湿后,经滤纸吸干,再小心地蘸取被检血清立于第一孔中,可以同时稀释11个血清,以双手合掌迅速搓动11根稀释棒,达60次,然后将11根稀释棒小心平移至第2孔,搓同样转速和次数,再移至第3孔(被检血清可以只稀释到第4孔,即血清稀释到1:40),而阳性猪血清、阴性猪血清必须稀释到第6孔。d.滴加抗原致敏红细胞  用微量移液器吸取摇匀后的2%抗原致敏红细胞悬液,每孔加0.025mL。e.抗原对照  为0.025mL稀释液加0.025mL 2%抗原致敏红细胞悬液,只做2孔。f.振荡加样完毕后,置微型振荡器上振荡15-30s,室温下静置1-2h,观察记录结果。(2)判定  以呈现“++”血凝反应的血清最高稀释度作为血清效价判定终点。

凝集反应强度标准如下:

++++  红细胞在孔底凝成团块,面积较大。

+++  红细胞在孔底形成较厚层凝集,卷边或锯齿状。

++ 红细胞在孔底形成薄层均匀凝集,面积较上二者大。出现“++’’以上凝集时为红细胞凝集阳性。

+  红细胞不完全沉于孔底,周围少量凝集。

±  红细胞沉于孔底,但周围不光滑或中心空白。   

一  红细胞呈点状沉于孔底,周边光滑。

微量反应板静置1-2h后,阳性对照猪血清效价应≥40“++”,阴性对照猪血清效价应<1:5,抗原对照应无血凝现象。

被检猪血清效价>1:10(即达到第2孔以上)时,判为阳性;效价<1:5时,判为阴性;介于二者之间时,判为可疑。

【贮藏】在2-8℃,有效期为6个月;在-15℃为1年6个月。
 

        品系用旋毛虫标准虫株,通过人工感染猪体的肌幼虫制成排泄-分泌抗原,再用旋毛虫单克隆抗体通过亲和层析法制成纯化抗原,包被于聚苯乙烯微量反应板,并配以1、2、3、4号试液和阴、阳性血清组装而成。用于诊断猪旋毛虫病。
【性状】抗原包被板无色,透明,干燥,无杂质吸附。1号试液为淡黄色澄明液体。2号试液为淡乳白色液体。3号、4号试液为无色透明液体。阴、阳性血清为淡黄色透明液体。

【作用与用途】用于诊断猪旋毛虫病的酶联免疫吸附试验。

【用法与判定】(1)样品准备被检血清作1:100稀释,血片作1:10稀释,阴、阳性血清作1:200稀释。(2)加样  反应板的每孔加检样2滴(约100uL),并设阴、阳性血清对照,室温静置2-3min。(3)反应甩掉被检液,每孔加1号试液1滴(约40uL),室温静置2-3min。(4)洗涤甩掉1号试液,每孔加2号试液1滴,立即用自来水或蒸馏水反复冲洗5次。(5)显色  拍干残液,每孔先加3号试液1滴,再加4号试液1滴,轻轻混匀,静置2-5min。(6)判定  在白色背景下,按下列标准判定:吸收度≤0.3、蓝色为阳性;吸收度≤0.08、无色为阴性。

肉眼观察                          吸收度(450nm)   

++++ 蓝色,明显深于阳性参照血清          <0.8

        +++  蓝色,深于阳性参考血清             ≤0.8

        ++   蓝色,近于阳性参考血清              ≤0.5

        +    蓝色,浅于阳性参考血清               ≤0.3

        一   无色或颜色浅于或接近阴性参考血清    ≤0.08

【注意事项】(1)每孔加入的1、2、3、4号试液的量要均等,最好加到孔中央,并严禁冻存。 (2)每孔加入2号试液后,必须用水充分冲洗,洗涤不彻底会影响结果。(3)第1号试液要密封保存,污染后不宜使用。第2、4号试液比较黏稠,要注意加足量。(4)室温低于25℃时,可适当延长每次反应时间,但最终判定结果,应在5min内完成(5)运输途中应避光、避高温和避碰撞。

【贮藏】在2-8℃有效期为10个月。
 


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