3．1物理激活
物理激活方法中，机械刺激和温度刺激，因其操作繁琐，稳定性和重复性差，且孤雌激活率偏低，较少被人们采用。相对而言，电刺激激活方法因简便易行、稳定性、重复性较好，且集激活和融合为一体，而被广泛应用。其原理是卵母细胞在短暂高压直流电脉冲的作用下，膜的磷酸二酯双分子结构的稳定性发生改变，细胞膜上形成很多可恢复的微小孔洞．使细胞内外[介质)中Ca2+进入细胞，并使胞质内Ca2+浓度升高，从而引起卵母细胞的激活。电脉冲引起的微孔大小受电脉冲强度、脉冲宽度、电脉冲次数、电激液类型等条件的影响。Vitullo等提出，控制电脉冲参数，模拟出正常受精过程中Ca2+浓度节律性脉冲升高，可复制出正常受精过程中的一系列变化。据张德福等报道，在猪卵母细胞激活过程中，进行一次电脉冲，其激活率和激活后孤雌胚发育效果均高于施以多次电脉冲刺激。Sin等则发现通过培养液调节Ca2+浓度水平比通过改变电脉冲强度和持续时间更有效。吴中红等通过用电激活得出其最佳场强和脉冲时程为130V／mm，作用8012-S的情况下，其囊胚发育率为(20．12±8．18)％，而且发现多次脉冲并不比单次脉冲的激活效果好。李光鹏等以体外成熟的猪卵母细胞为材料，以乙醇、电脉冲和氯化锶为人工刺激条件，研究了蛋白质合成抑制剂一亚胺环己酮(CHX)对猪卵母细胞的孤雌激活效果的影响。结果表明，乙醇、电脉冲和SrCl，均可使猪母细胞激活，而电脉冲的激活效果最好。当分别与CHX联合使用时，激活率显著高于单独的乙醇、电脉冲或SrCl，刺激。说明，CHX与乙醇、电脉冲及SrCl，联合使用对猪IVM卵母细胞激活具有显著的协同促进作用。
3．2化学激活
乙醇是发现较早的一种化学激活剂，其机理在于乙醇可以改变卵母细胞膜的稳定性，使钙库的Ca2+释放出来，同时增加细胞外Ca2+的渗入，从而胞质内Ca2+浓度升高引起卵子活化。乙醇对卵母细胞的激活主要是引起细胞膜IP3的形成，通过IP3受体介导Ca2+释放。目前经过大量的实验己经证实：乙醇激活卵母细胞一般采用了7％～8％的培养液作用5～7 min可取得较好的激活效果，长时间处理会降低激活率。大量研究表明，单纯的乙醇刺激激活率较低，只有联合其他激活方法后，激活率才会有所提高。离子霉素(lonmycin，lon)是近年来发现的一种高效Ca2+载体，已被广泛地应用于哺乳动物卵母细胞的激活中。lon与钙离子载体A23187不同的是，lon并不直接引起Ca2+的跨膜转运，而是动员细胞内的Ca2+，依次触发Ca2+内流，引起细胞内Ca2+升高，从而造成卵母细胞的激活，与乙醇相比，由于它仅动用钙库内的Ca2+，所以引起的Ca2+波动较为平缓，因而效率更高。Sr2+与Ca2+属于同族的二价阳离子，是目前已知唯一能引起胞内Ca2+多重升高的二价阳离子，Sr2能诱发胞质内一系列Ca2+浓度的升高，并且能使激活的卵子达到原核阶段。Sr2对卵母细胞的激活作用可能是通过细胞膜上的Ca2+通道进入细胞内，并进入钙库(内质网和线粒体)，置换出内源Ca2+释放入胞质中，使胞内游离的Ca2+浓度增加，进而介导了依赖Ca2+多重升高的皮质反应。另外，蛋白质合成抑制剂CHX(亚胺环己酮)和蛋白质磷酸化抑制剂6-DMAP(6一二甲氨基嘌呤)也用于卵母细胞的孤雌激活，CHX主要抑制卵母细胞维持在MⅡ期所需要的MPF和CSF的合成，进而使卵母细胞内MPF活性迅速下降，卵母细胞脱离M Il期，完成第2次减数分裂导致卵母细胞激活。CHX可使小鼠和牛卵母细胞发生激活，但单独使用CHX不能使猪IVM卵母细胞活化，说明猪卵母细胞对CHX不敏感，只有与其他刺激因素联合使用时才能起协同促进作用。由于在卵母细胞成熟和受精过程中涉及到多种蛋白质的磷酸化和去磷酸化，所以，作为一种重要的蛋白质磷酸化抑制剂6-DMAP常用于卵母细胞的激活中，它通过抑制β-蛋白第l61位酪氨酸的磷酸化和cyclinB的磷酸化使MPF活性下降。细胞分裂由M II中期向末期11发展。同时6-DMAP还抑制纺锤体形成时微管蛋白的磷酸化进而抑制了极体的排出，但对DNA的合成没有抑制作用。此外，细胞松弛素B(CCB)、透明质酸酶、乙基汞硫代水杨酸钠(thimerosal，THI)和二硫苏糖醇(dithiothreitol，DTT)等其他激活剂对卵母细胞也有一定的激活作用，但效率较低，须与其他激活剂联合使用才能提高激活率和发育率。
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