支原体感染所致的关节炎：诊断要点

　　当关节腔内关节液较少时，也可在仔细切开关节后，利用多个拭子无菌收集关节液（见图3B）。采集多片滑膜组织，并浸泡在10%的福尔马林中以用于组织病理学观察。确诊时，除了发现病原体外，还应观察到特征性病理组织学病变。也可对感染部位进行外科消毒处理后，使用无菌注射器与针头从活猪肿大的关节内采集关节液。这种操作的优点在于不需对猪只进行安乐死。但是，这种样品采集方法会使猪只感觉不适，通常需要先对猪进行镇定后再进行采样。

图3：A.在实验室诊断之前，从临床表现为跛行的6周龄仔猪关节腔内采集关节液。

　　B.利用棉拭子从关节腔内采集样品用于检测。（照片来自爱荷华州立大学兽医诊断实验室）

　　通过对从断奶至育肥不同生长阶段的猪群进行有代表性的采样检测，可判定支原体感染在某一猪群中的流行状况，也可对某一特定的猪群持续性的采样监测一段时间，以从纵向角度判定支原体感染所致的关节炎在该猪群的流行状况。有代表性的采样检测分析可了解某一特定猪群在某一段时期内支原体阳性患猪的数量。但此方法的不足之处是：所选猪群的支原体流行状况可能无法代表整个猪群。故为了判定猪群滑液支原体或猪鼻支原体的感染时间或判断阳性猪群的感染状况，更适合采用从水平角度研究或对猪群进行持续性研究的方法。但是，无论哪种方法，都需要根据疾病发生状况与猪群状态（如：若猪群胎次结构比较稳定，所需研究的动物组数可少些）来选取多组动物进行研究分析。应分别采集鼻腔拭子与扁桃体刮取物样品，不可将两种样品混合后再进行综合分析。因为鼻腔拭子样品中常会检测到猪鼻支原体，而扁桃体刮取物更适于猪滑液支原体的检测。

　　送检样品

　　向兽医诊断实验室送检样品时应完整而详细的了解疫病的病史与临床状况等。完整的病史信息包括描述发病动物的临床症状、大小、数量、死亡率及鉴别诊断等信息。在向诊断实验室提交关节液或渗出液前应将样品转移到聚苯乙烯管内以避免样品在转移过程中发生泄漏、交叉污染或损坏等。应将关节液或其拭子、组织样品、渗出液、完整关节或四肢等样品放置在冰块上，并在采集样品后24小时内送至兽医诊断实验室。转运时应将拭子样品放置在转运培养基内（如：Amies运送培养基）以防止样品脱水。浸泡在10%的福尔马林溶液中的组织样品应进行相应的标识、包装等处理，以防止溶液发生泄漏。若不具备适宜的样品采集条件或设备，可送检感染猪只的整个猪腿或整个活猪只，且最好选择急性发病猪。所有送检至兽医诊断实验室的样品应保持新鲜，在输运前或运输过程中应处于冷藏状态。

　　诊断分析

　　实时定量PCR是迄今为止最敏感的支原体检测方法。目前已将实时定量PCR方法用于猪鼻支原体与猪滑液支原体的检测，该法可直接用于临床样品（如关节液）、关节拭子、鼻腔拭子或扁桃体刮取物等的检测。也可以根据需要进行细菌分离培养。若有必要，也可对所分离培养的菌株进行进一步的特性分析，如进行抗生素耐药性分析等。但细菌分离培养是件非常耗时的工作，有时会因其它细菌的过度生长而影响分离培养的结果。支原体只有在特定的培养基内才能够生长，这对支原体的分离培养工作提出了特殊的要求。

　　观察支原体感染所造成的特征性组织病理病变对于确诊支原体感染所致的关节炎是非常有必要的。滑液支原体感染的微观病变包括滑膜异常增生，滑膜绒毛中等程度的增生、水肿并伴随有单核细胞浸润性炎。猪鼻支原体感染常可导致浆膜与滑膜内有大量的单核细胞与嗜中性粒细胞浸润，从而导致慢性感染的患猪软骨受侵蚀、关节翳形成。

　　对于支原体阳性猪群，仔猪体内的母源抗体可持续至断奶后的一段时间，但母源抗体具体的持续期尚未研究清楚。对某一特定猪群断奶仔猪的抗体水平进行持续性监测可用来确定猪群感染支原体的时间。即使在猪体内监测不到支原体抗体的情况下，PCR检测结果呈阳性也是很常见的。猪群在试验条件下感染滑液支原体后，其体内抗体可持续6个月。支原体在猪扁桃体内的感染程度常与患猪的抗体水平呈正相关。同样，上市猪体内的支原体抗体水平越高，其扁桃体内存在支原体感染的可能性越大。

　　图4：A 样品来自于12周龄的生长猪，患猪临床表现为跛行，利用实时定量PCR检测患猪关节液，滑液支原体呈阳性。病理切片显示慢性增生性滑膜炎，滑膜发生单核细胞浸润性炎症，滑膜细胞增生肥大（箭头所示）（H&E染色，放大倍数：100倍）。B：样品来自6周龄的仔猪，患猪关节肿大，利用实时定量PCR检测患猪关节液，猪鼻支原体呈阳性。星号（*）表示滑膜呈现纤维素性化脓性炎，滑膜下结缔组织内有大量单核细胞与嗜中性粒细胞。箭头表示滑膜细胞增生肥大。（H&E染色，放大倍数：100倍）。照片来自于爱荷华州立大学兽医诊断实验室。

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