猪胚胎移植技术的研究及其推广价值 - 猪e网

摘要：本文对猪胚胎移植技术的各个操作环节和相关的配套技术进行了系统的试验研究。用PMSG+HCG的激素组合，对不同品种的青年母猪做超数排卵处理，稳定地使其排卵数增加一倍；建立了有效的母猪同期发情技术。输卵管采集胚胎的获胚率达到79.9%（超数排卵组）和81.8%（自然发情组），子宫角采集胚胎的采胚率71.9%。胚胎输卵管移植的受孕率达到80.5%，产仔数7.5±1.2头；子宫角移植的受孕率达到83.8%，产仔数7.8±0.9头。提出猪胚胎移植技术在养猪" href="http://cj.zhue.com.cn/jinrijujiao/" target="_blank">养猪生产中具有广泛的推广价值。

猪胚胎移植试验成功最早于1951年由Kvashickii报道^[1]。到20世纪60年代，已经基本建立了外科手术方法采集和移植胚胎的技术。由于猪生殖道的特殊形态：（1）子宫颈的皱褶较多较深，由子宫颈将冲卵管送入子宫有一定难度；（2）子宫角过长（80～100cm），盘绕过多，容积过大。上述两点使非外科手术采集和移植胚胎相当困难。同时，由于猪繁殖力较高，用胚胎移植技术从少数优良个体获得较多后代的要求不像对牛羊那么迫切，因而制约了胚胎移植技术在养猪生产中的普遍应用。尽管如此，到70年代以后，北美和欧洲也开始将这种基于外科手术的胚胎移植技术应用于向闭锁猪群引进外血和国际间的引种。^{[2] [3] [4]}

本课题组于1989年初步建立了猪胚胎移植技术，当时的主要目的，是出于转基因猪和猪胚胎工程研究工作的需要。以胚胎移植做为基本技术平台，建立了转基因猪技术，先后将六种外源基因导入猪的受精卵，得到了相应整合并表达的转基因猪^[5]；建立了猪卵巢卵母细胞体外成熟和体外授精技术，得到了体外受精胚胎移植的“试管猪”^[6]；建立了猪胚胎细胞核移植技术，得到了核移植重组胚胎移植的“克隆猪”^[7]。与此同时，十几年来对猪常规胚胎的移植及相关技术，例如同期发情，超数排卵等也进行了大量的探索和研究，得到了一些试验结果。为胚胎移植技术在养猪生产中的应用奠定了技术基础。

一、 猪的超数排卵

以PMSG+HCG的激素组合处理，对影响猪超排效果的主要因素进行了试验研究。^{[8] [9]}

1、不同品种母猪的超排效果

对性成熟后四个品种的青年母猪，PMSG按每公斤体重15IU处理，其超排结果如表1。

表1 不同品种母猪的超数排卵效果

品种	处理头数	平均排卵数	自然发情的排卵数
湖北白猪	119	23.7±8.7	11.7±3.2(104头)
北京花猪	16	22.3±9.9	12.2±2.5(15头)
杜洛克	36	17.8±5.3	9.8±2.9（15头）
太湖（枫经）	20	32.5±9.6	15.6±4.5（16头）

从表1可见，超排处理使青年母猪的排卵数在其原有的基础上提高一倍左右。

2、PMSG用量对超排效果的影响

对青年湖北白猪，按PMSG的不同用量处理，其结果如表2。

表2 PMSG用量对超数排卵效果的影响

PMSG用量（IU）	试验头数	头均排卵数	囊肿发生数（%）
750	9	13.6±6.5^ab	0(0)^a
1000	14	23.9±9.2^c	0(0)^a
1250	16	27.9±8.6^c	1(6.3)^a
1500	10	17.6±9.1^b	50(50)^b
1750	8	10.6±6.3^a	6(75)^b
对照	18	13.1±4.5^ab	0(0)^a

同一栏数中具有不相同字母上标示差异显著（P<0.05）

从表2可见，PMSG用量过小，达不到超排效果；用量过大，易引起卵巢囊肿，排卵数减少。

3、发情周期不同时间处理对超排效果的影响

分别对湖北白猪青年母猪在发情周期的11-18d进行等剂量的PMSG+HCG处理，结果如表3。

表3 发情周期不同时间超排的效果

情期天数	处理头数	发情头数（%）	头均排卵数
11～12	10	5(50.0)^a	7.8±2.6^a
13～14	12	8(66.7)^a	15.1±3.1^a
15～16	12	12(100.0)^b	19.8±6.1^b
17～18	18	18（100.0）^b	23.5±8.8^b

PMSG剂量为1000IU，72h后HCG1000IU

结果显示在情期的15～18d处理均收到良好效果，排卵数及超排的有效率均显著高于11～14d处理。

二、母猪的同期发情

在供体做超数排卵处理、注射PMSG的同时，对处于情期13-18天的受体母猪注射PMSG（按每公斤体重I0IU），72小时后，等剂量的注射HCG，其实验结果如表4。

表4 青年母猪同期发情处理结果

情期天数	处理头数	发情开始时间
13	15	4～6天
14	15	4～5天
15	32	3～5天
16	22	3～4天
17	35	3～4天
18	35	3天

由于受体与供体同一天内发情或比供体迟一天发情，其胚胎移植的效果无显著差异，因此，用这种方法选择与供体发情同步的母猪是有效的。也可以选择与供体自然同步发情的母猪做受体。

三、胚胎的采集

根据采集胚胎的部位不同，分为输卵管采胚和子宫角采胚。

统计对青年湖北白猪采胚胎结果如表5。

表5 青年母猪采胚结果表

时间	采胚部位	处理	母猪头数	排卵总数	获胚总数	获胚率%
1991～1995	输卵管	超数排卵	119	2817	2154	76.5^a
		自然发情	104	1222	892	72.9^b
	子宫角	超数排卵	26	502	361	71.9^b
1998～1999 输卵管		超数排卵数	60	1128	901	79.9^c
		自然发情	62	714	579	81.1^c

从表5可见：（1）输卵管采胚的获胚率明显高于子宫角；（2）输卵管采胚，超数排卵组和自然发情组的获胚率无显著差异；但超排组每头母猪比自然发情组多获胚8.2头；（3）就输卵管采胚而言，1991～1995年的数据与1998～1999年相比，尽管采胚的基本方法没有实质上的改变，但由于细微技术上的改进以及人员操作的熟练，使采胚率提高了五个百分点。

四、胚胎的移植

根据移植的部位不同，也分为输卵管移植和子宫角移植。

表6 猪鲜胚移植试验结果

移植部位	受体头数	平均移胚数	受孕率%	产仔数
输卵管	36	15.1±2.6	80.5(29/36)	7.5±1.2
子宫角	24	14±1.5	83.3(20/24)	7.8±0.9

从表6可见，输卵管移植的受孕率和产仔数略低于子宫角移植，但两者的差异不显著。

移入胚数对受体受孕和产仔数的影响

猪鲜胚移植的受孕率和产仔数与移入正常胚胎的数量有关。

表7 移入胚数对受孕率的产仔数的影响

移入胚数	受体头数	受孕率%	产仔数
5～10枚	9	44.4(4/9)^a	3.8±1.2^a
10～15枚	17	76.4(13/17)^b	6.2±1.2^a
15～20枚	19	78.9(15/19)^b	7.5±1.5^b
20枚以上	5	80.0(4/5)^b	7.8±0.9^b

从表7可见，一次移入15枚左右发育正常的胚胎，可以确保正常的受孕率的产仔数。而移入20枚以上的胚胎，既不会提高受孕率，也不能明显增加产仔数，反而浪费了取之不易的胚胎。移入10枚以下的胚胎，受孕率和产仔数都受到影响。^{[10] [11]}

五、讨论

1、本项目研究的结果表明：通过超数排卵处理，使母猪的排卵数稳定有效地提高一倍；输卵管采胚的获胚率达到80%，输卵管移植的受胎率接近80%，平均产仔数在8头左右。其总体效率比本交配种低，接近人工授精的水平。尤其是输卵管采胚技术，对母猪的生殖道无创伤，术后母猪伤口的愈合良好，内脏未出现明显的粘连现象，下一个情期发情、怀孕和产仔情况正常，能够重复利用。这为我们在养猪生产中推广应用胚胎移植技术，奠定了良好的技术基础。

2、就我国目前养猪生产的实际情况，至少在以下几方面，猪的胚胎移植技术极具推广应用的价值。

（1）在种猪场“精华母猪”快速扩繁中的应用。一个种猪场" href="http://js.zhue.com.cn/yangzhujishu/zhudehuanjing/200808/26-42385.html" target="_blank">猪场为了维持其出栏量，留有数百乃至上千头种母猪。然而这些选留的繁殖母猪称得上是“精华母猪”的为数不多。如果应用胚胎移植技术，以“精华母猪”做供体，不能留做种用的杂交母猪或地方母猪做受体，则可以大大提高精华母猪的繁殖力，提高出栏种猪的质量。

（2）特殊品种的快速扩繁。某些特殊品种猪，例如：香猪，版纳猪，五指山猪，野猪等，普遍繁殖力很低，一般产仔数在4～6头左右，应用胚胎移植技术可大大提高其繁殖力。

（3）地方猪的品种改良。目前，地方猪的品种改良，普遍采用引进良种公猪与地方母猪杂交的方式，得到的后代为杂种猪，不能做种用。如果采用胚胎移植的方式，以良种猪做供体，地方母猪做受体，得到的后代即为纯种猪，从而大大加快改良的进程。

（4）猪的MOET育种。

（5）用胚胎的运输代替种猪的运输。目前猪场引进种猪，不仅耗费昂贵的运输费，运输过程中种猪应激，减重，死亡也不可避免。更重要的危害还在于各种病原的传播，给猪场带来难以估计的损失。用胚胎的运输代替种猪的运输，不仅可以节省开支，而且防止了各种病原的传遍。

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