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一种饲用纤维素酶酶学性质的研究

作者:潘晓亮 等来源:中国猪e网时间:2008-12-22 15:54点击:

        试验通过对一种微生物产纤维素酶的酶学性质的研究,为此类酶在实际生产中的应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂纤维素酶;羧甲基纤维素钠(CMC—Na);3,5一二硝基水杨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖、亚硫酸、酒石酸钾钠。 1.2 主要仪器 722分光光度计、电子天平、可调恒温水浴锅。 1.3 酶活力测定纤维素酶的测定采用DNS还原糖法。测定滤纸酶活和CMC酶活的反应条件参照文献[1]。分别计算出3个吸光度的平均值,在标准曲线上查找出对应的葡萄糖含量,计算出酶活力。
         2 试验内容 2.1 不同反应温度条件下的酶活测定调节恒温水浴锅,分别设定温度为3O,4O,5O, 55,6O,65,7O,75℃ ,按照上述测定方法,测定不同温度下滤纸酶活和CMC酶活。 2.2 不同pH值条件下的酶活测定用0.1 mol/L柠檬酸与0.1 mol/L柠檬酸钠以不同体积比例混合,配制pH值为3.0,3.5,4.0,4.5, 5.0,5.5,6.0,6.5,7.0的缓冲液,用不同pH值的缓冲溶液配制0.51% 的CMC溶液,其他条件不变,测定不同pH值(5O℃)条件下的酶活。 2.3 酶温度稳定性研究将酶液分别在4O℃保存1,2,3,4 h和8O℃保存1 min和5 min,测定滤纸酶活和CMC酶活。 
       3 结果与分析 3.1 温度对纤维素酶酶活的影响(见表1) 从表1可以看出,低温时纤维素酶的滤纸酶活和CMC酶活都很低,随着温度升高,酶活也逐渐升高,当反应温度升高到60℃时,两种酶活都达到最大,随后随温度升高,酶活开始降低。因此,此纤维素酶合适的反应温度为6O℃。3.2 pH值对纤维素酶酶活的影响(见表2) 从表2可以看出,pH值为3.0时纤维素酶的滤纸酶活很低,pH值4.0~5.5范围内酶活迅速升高。一种酶表现最大酶活时的pH值为最适pH值,按照此pH值将酶分为酸性酶或中性酶。 由此可见,该酶为酸性酶,最适pH值为4.0~5.5。 3.3 低温长时与高温短时对酶活的影响(见表3) 从表3可以看出,在4O℃下保温处理,该酶都表现出较强的稳定性。在8O℃处理1 min,其酶活损失近一半,表明该酶耐高温性能较差,不适合在饲料制粒前添加,如需添加则应经包被等耐热处理。
       4 讨论与小结  从总的酶学性质来看,该酶的最适温度为6O℃ ,最适pH值为4.0~5.5,这和单胃动物消化道环境的pH值条件相当接近。因此,该酶作为外源性饲料用酶较为合适,不适合在饲料制粒前添加,如需添加则应经包被等耐热处理后再添加入饲料中,而对于其他性质和利用有待于更进一步研究。

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