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澳洲动物疫病专家分享非瘟诊断与检测技术

作者:佚名来源:兽医检测诊断大会时间:2019-06-05 20:32点击:

本次分享来自第一届兽医检测诊断大会(上海),澳大利亚动物健康实验室的大卫•威廉姆斯。笔者摘取其中诊断和检测技术,供大家参考。

 Part 1

非洲猪瘟诊断病原学技术

 1、非洲猪瘟的实验室诊断程序

 

2、ASFV感染后动力学

病毒血症和散毒,血液中病毒含量高,鼻和粪便拭子病毒水平低于2-3logs,

病毒散毒发生于临床症状出现前两天。

口腔液作为早期诊断推荐样品,EDTA抗凝全血推荐为确诊样品,谨慎剖检

 在高毒力非洲猪瘟病毒GRG/07中:在血液、脾和淋巴结中病毒滴度高

 3、报道的非洲猪瘟的主要PCR检测方法:

4、学到什么

 多种病毒学和分子方法可用于检测和鉴定ASF病毒

 • PCR是疫情调查和常规诊断的前沿检测方法,特点:

 • 敏感,特定,快速

• 抗原检测试验敏感性较差,但成本低,速度快

• 病毒分离依赖于原代猪细胞,需要新的敏感细胞系

 Part 2

非洲猪瘟诊断血清学技术

1、ASFV感染后动力学

病毒和抗体检测都应在爆发和控制/根除中进行

对于急性疾病的爆发,病毒检测(PCR)最有用,血清学诊断价值较低,因为大多数猪在抗体反应前死亡,在7-10天内;但是如果存在幸存的猪只,特别是ASFV转变为中等毒力或者弱毒力毒株之后,抗体检测的作用凸显;

 2、抗体检测------ 一般考虑因素

• 由于没有疫苗,抗体的存在表明当前或过去的感染      

• 抗体出现较早(7-10 dpi),可在幸存者中持续数年

• 然而,在急性期或急性感染中,猪只常在产生可检测到的抗体之前死亡。因此,在疫情调查中也应采集样本进行病毒检测

• 抗体不能完全中和

• 建议进行以下血清学检查:

– ELISA作为一种筛选工具

– 间接荧光/过氧化物酶抗体试验(IFA/IPX)或免疫印迹(IB)确认

3、抗体检测的样品类型

• 血清

• Haemolysis à false positives in ELISA

• 溶血 à ELISA假阳性

• 血浆

• 猪肉浸出液,组织渗出物

• 口腔液

• 取样方便,无创

• Ab水平低于全血或血清

• 干血(滤纸或拭子):方便取样和储存(例如在偏远地区或没有冷链时);Ab水平低于全血或血清

 4、抗体检测-取样技术


建议在处理和检测前加热灭活血清中的ASF病毒,以达到生物抑制和方便;

OIE推荐:56℃/70分钟或60℃/20分钟然而,这些条件可能无效

5、ELISA的优缺点:

• 优点

• 快速测试与解释

• 高通量、自动化

• 缺点

• 在监测研究中,IPX/IFA的敏感性低于IPX/IFA,可能代表的血清价偏低;当使用质量差的样品时,其特异性容易降低;确认性测试很重要,如果可能的话

6、口腔液的诊断潜能:

• 唾液和血清中含有抗体和病原体的混合物

• 作为猪病原体的另一种诊断样本    

• 比如PRRSV, PCV2, influenza, ASFV

• 在圈中采样时,代表群(组)样本

• 成本效益高、简单、安全、“福利友好”、劳动强度较低

• 有潜力对大量猪群进行有效监测

总结:

• 一系列血清学技术可用来可靠地检测抗体的ASFV

• 建议与病毒检测方法一起使用,但在急性ASF暴发中,血清学的诊断价值较低

• 最常用的ELISAs; Se的不同水平

• IFA/IPX测定的Se最高,但主要用于参考实验室的确认

• 其他样本类型可用于抗体检测(例如血样、口腔液、组织渗出液)


责任编辑:王成瑞  

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