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介绍一种猪康复血清的简易制备方法

作者:唐万勇来源:武汉回盛生物科技有限公司时间:2015-02-11 10:30点击:

  猪感染某些传染性疾病且耐过康复后,由于强烈的特异性免疫反应,使得血清中存在高水平的特异性抗体。将这些猪只采血并制备血清,对于某些以体液免疫为主的传染性疾病的预防和治疗是非常有效和经济的方法,尤其在一些重大疫病的紧急防控中具有不可替代的价值。   

  猪康复血清、高免血清疗法均是在猪只接触或暴露于病原后,利用其血清中的特异性抗体来防控同一疾病的方法。一般而言,康复血清多指猪只自然感染强毒且耐过后制得的血清,而高免血清则更多是用人工方法反复接种抗原而得到的血清。本文介绍了猪场内部制备和使用康复血清的方法。作者认为,在国家法规允许的情况之下,猪场使用内部康复血清进行疾病防控是正当且必要的。  

  1.  准备。在制备康复血清之前,应按以下各项要求准备:

  1.1 猪只:选择发病28天-2个月的母猪或肥猪,临床检查应无其它疾病。

  1.2 场地:清洁、通风、通行便利的室内或室外。面积不小于10平方米。场地应布置一高度为60cm左右的平台,平台以平放一头200-300kg猪只为宜。平台使用前1小时,消毒药喷洒。

  1.3 人工:4-5名工人保定猪只、采血操作者2名。要求工人另外准备一套干净的工作服靴,待采血操作完毕后应及时更换。

  1.4 杀猪刀,保定器械(绳子、手套等)。事先皆经过消毒处理。

  1.5 容器:带盖的干净塑料桶(或搪瓷容器)1-2个,,用于盛放血液。要求容积不小于10L,使用前经消毒处理,且使用生理盐水洗刷3次。

  1.6 生理盐水:100ml、500ml各10-20瓶。要求在使用前将瓶盖撬开,方便拔出橡胶塞。

  1.7 干净的漏斗(塑料或玻璃)2-3个。用前经清洗消毒处理。

  1.8 注射器(50ml、100ml)2-3支。用前经清洗消毒处理。

  1.9 恒温水浴锅。猪场做人工授精的水浴锅即可。

  1.10 其它:如毛剪、消毒水等。如果猪场采用颈动脉放血,或还应准备离心机等。  


  2.  放血。

  猪只可经自然放血或颈动脉放血(右图),本文只介绍自然放血。

  2.1 将合乎要求的康复猪放置在操作台上,捆住四肢保定牢固。

  2.2 颈部作剪毛和消毒处理(酒精棉球擦拭);杀猪刀消毒。

  2.3 生理盐水洗刷盛血容器一次,控干,盖好盖子。注意:少量剩余生理盐水在容器内无大碍,且有利于血清析出。                                                                                

  2.4 杀猪、放血至容器。

  自然放血最大的问题就是放血是否彻底。在实践中,经常出现猪只已死,血还没有放完的情况,加之自然放血也很易收到污染,因此作者建议,有条件的应尽量采取颈动脉放血术实行放血。

  3. 血清析出。

  3.1 将盛血的容器静置于室内,让其自然凝固,析出血清。不可摇晃,以免溶血。

  3.2 一般在秋冬季10-20℃环境下,3-4小时即可析出血清。

  3.3 在血清析出过程中,可在中间检查一次,若见血清上漂浮大块血凝块,则可用消毒手术刀轻轻划动,让血块分散,以利血清更好析出。

  3.4 不同情况下,猪只采血量和制得的血清量有差异。若放血完全,可参考表1得出血清量。

  表1  不同猪只采血量和血清量参考值

  4.  血清分装。

  4.1 血清完全析出后,将血凝块捞出丢弃并妥善处理。

  4.2 将容器内的血清用注射器抽取后,或用漏斗直接分装至空的生理盐水瓶中。注意装量不可太满,一般以容量的80%为宜,即标称500ml的实际装400ml。

  4.3 剩余血清若混有较多血细胞,仍可收集使用。如有离心机,也可经3000转/分,经3分钟离心取上清液。

   

  5.  血清水浴灭活;加入“双抗”。

  5.1 将水浴锅加水调至56℃。水线以淹没血清的最高水平线为宜。

  5.2 血清置水浴锅,经30分钟水浴。

  5.3 将血清冷却,加入“双抗”。建议按照每400ml血清添加青霉素1,000万单位、链霉素300万单位。现在也有按照100ml血清添加2.5ml的5%恩诺沙星注射液的。二者皆可。

   

  6. 血清保存。

  血清可短暂存放于室内或冷藏,也可较长时间存放于冷冻环境下,在冻干条件下,甚至可长期保存数年之久。猪场应根据使用时机,制定血清保存方案。

  6.1 若在1-2日内使用完,可直接放置于室温下10-20℃遮光保存。

  6.2 若在5-7日内使用完,可在4℃条件下冷藏保存;

  6.3 若在-21℃条件冷冻保存,则可保存数月甚至1年。注意冷冻后的血清解冻后需迅速用完,不可反复冻融。另血清冻结时要防止玻璃瓶冻裂。

   

  7. 血清使用。

  7.1 血清一般采用肌内注射或皮下注射,按0.5-1.0ml/kg体重,每7-10日重复使用1次。

  7.2 猪场可根据生产安排,在仔猪出生、1周龄、2周龄、断奶、转群等时机注射。

  特别说明:因个体差异等原因,不同批次血清的效果可能存在一定差异!




责任编辑:龚胡  

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