当前传染性胸膜肺炎的诊断与防控体会

　　3.2.1 血清型的多样性与毒力差异

　　目前已知胸膜肺炎放线杆菌至少有2种生物型与15种血清型，不同血清型之间及同一血清型不同菌株之间的毒力均存在差异，从而导致该病的诊断非常困难[2]。

　　影响胸膜肺炎放线杆菌毒力的因素很多，但是否存在毒力基因.ApxI、ApxII与ApxIII是影响该菌毒力的重要因素。这三种毒力基因能够产生毒素，阻断中性粒细胞与巨噬细胞的吞噬功能，从而影响猪只免疫防御功能。而毒力因子Apx IV广泛存在于各种血清型的胸膜肺炎放线杆菌内，且具有良好的种特异性，近年来所发展多种APP诊断方法（PCR或ELISA）均以检测Apx毒力基因及其抗体为基础。

　　为了判断胸膜肺炎放线杆菌在疫病发生过程中的作用，在本病诊断与监测过程中，应选择适宜方法对该菌的血清型与毒力进行检测。目前主要的血清分型方法包括补体结合实验、间接血凝实验、ELISA等，同时也发展出多种PCR分型技术，通过检测细菌纯培养物的ApxI、ApxII 与 ApxIII等毒力基因（表1）来确定病原菌的血清型与潜在毒力。如赵耘等人建立了多重PCR方法可对1～8型的APP进行血清型分型[3]；L. Zhou等人建立了多重PCR方法对具有免疫交叉反应的血清型（3、6与8）进行了鉴别诊断[4]。

                                                                                                                 表1：毒力基因APX与血清型的关系

　　3.2.2 病原菌检测

　　细菌分离与PCR检测是目前最常用的胸膜肺炎放线杆菌病原检测方法。胸膜肺炎放线杆菌培养条件较苛刻，时间投入大，分离部位（扁桃体、气管或肺等）常有杂菌污染，导致分离失败。可用5%的羊血琼脂培养基从肺部、扁桃体及气管内分离病原菌，该菌与表皮葡萄球菌或金黄色葡萄球菌共培养时可出现完全溶血现象。也可用病变肺组织作抹片直接进行显微镜检查（革兰氏阴性杆菌）。从慢性胸膜肺炎的患猪或已用药物治疗的肺组织中分离培养胸膜肺炎放线杆菌难度更大，故依靠细菌分离确诊慢性型APP的难度较高。

　　APP的毒力基因Apx IV具有种特异性，目前所开发的多种PCR方法均以检测Apx IV为基础，检测对象常为细菌纯养物。直接用PCR检测新鲜肺中是否存在胸膜肺炎放线杆菌的方法已建立并商业化（ADIAVET® APP 检测试剂盒），还建立了套氏PCR方法（灵敏度可高达10个细菌）对经过甲醛固定处理并包埋在石蜡中的肺组织样品进行APP检测[5]，还可用实时定量PCR直接扁桃体中病原菌（灵敏度：5个细菌）[6]，但这种直接检测病料中病原菌的方法尚未普遍推广[7]。

　　3.2.3 抗体检测与监测

　　酶联免疫吸附实验（ELISA）是检测或/和监测APP抗体的最常用方法且已成功商品化。因胸膜肺炎放线杆菌的分离培养，特别是从慢性型或亚临床型病例中的分离率较低，故血清型方法对于本病的诊断与监测尤为重要[8]。APP抗体检测的主要方法包括：溶血素中和试验（HNT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）及补体结合试验等。补体结合试验因特异性差、操作繁琐等原因现已很少使用[9]。ELISA因特异性与敏感性均较好，已成为最常用的APP抗体检测与监测手段，目前已有多个商品化ELISA试剂盒，如IDEXX公司的Apx IV抗体检测试剂盒、Biovet 公司的细菌分型ELISA试剂盒等，但两者所检测抗体标的物不同，IDEXX公司的试剂盒检测的是Apx IV抗体，因Apx IV毒素仅在体内感染时才能表达，在细菌体外培养时不能分泌该毒素，故检测Apx IV毒素抗体的试剂盒可用于区分自然感染与疫苗免疫，对猪群的感染状态进行判断，但无法确定细菌的血清型与毒力。而Biovet等公司的试剂盒检测荚膜脂多糖抗体，可对APP的某些血清型与细菌毒力进行鉴别诊断，但无法区分自然感染与疫苗免疫且易出现假阴性。

责任编辑：