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猪细小病毒感染的免疫防制

作者:来源:时间:2008-05-15 09:46点击:

猪细小病毒感染(Porcine prarvovirus infection)是猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)引起母猪繁殖障碍病。本病特征是怀孕母猪发生流产、死产、胚胎死亡和胎儿木乃伊化,而母猪本身并不表现临床症状。其它猪感染后也无明显的临床症状。本病一般呈地方流行,有时呈现暴发,多见于畜群初次感染,特别是初产母猪症状明显。自1966年发现第一例PPV病例以来,截止1995年底,据不完全统计,世界上47个国家相继报道本病,它们遍布五大洲,由此可以推测PPV可能普遍存在于世界上的每一个国家,只是发现迟早的问题。在我国几乎所有养猪密集的地区都有本病的发生,给养猪业造成了巨大的经济损失。
1 流行病学
猪是已知的唯一易感动物,不同年龄、性别的家猪和野猪都可感染。传染源主要是感染本病毒的母猪和公猪。病毒可通过胎盘传给胎儿。本病除可经胎盘感染和交配感染外,母猪、育肥猪和公猪主要通过被污染的食物、环境,经呼吸道和消化道感染。污染的猪舍在病猪移出后空圈四个半月,经常规方法清扫后,当再放进易感猪时,仍能被感染。
本病常见于初产母猪,一般呈地方流行性或散发。在本病发生后,猪场可能连续几年不断地出现母猪繁殖失败。母猪怀孕早期感染时,其胚胎、胎猪死亡率高达80d~100%。猪感染猪细小病毒1~6天后可产生病毒血症,1~2周后随粪便排出病毒,污染环境。7~9天后可检测出血凝抑制抗体,21天内抗体效价可达1:15000,且能持续数年。
2 症状
仔猪和母猪的急性感染通常都表现为亚临诊病例。母猪在怀孕30~50天之间感染时,主要是产木乃伊胎。怀孕50~60天感染时出现死产。怀孕70天感染的母猪则常出现流产症状。母猪在怀孕中后期受感染后也可发生经胎盘感染,但此时胎儿常能在子宫内存活而无明显的临诊影响。因而怀孕期70天后,大多数胎儿能对病毒感染产生有意义的免疫应答而存活,但这些仔猪常带有抗体和病毒。
此外,本病还可引起产仔瘦小、弱胎、母猪发情不正常、久配不孕等症状。对公猪受精率和性欲没有明显的影响。
3 病理变化
眼观病变为母猪子宫内膜轻微炎症,胎盘有部分钙化,胎儿在子宫内有被溶解、吸收的现象。感染胎儿还可以见到充血、水肿、出血、体腔积液、木乃伊化及坏死等病变。
4 免疫
因本病无有效的药物治疗方法,因此应用疫苗预防免疫就显得更为重要。
4.1 弱毒疫苗
最早发现和应用于临床的是PPV NADL-2弱毒株,该毒株是将PPV强毒在实验室利用细胞培养连续传代50次以上致弱的,分子生物学研究证实,该毒株的基因组比强毒株PPV NADL-8在VP2基因上少300bp。临床实验证实,血清学阴性的怀孕母猪口服或鼻内接种NADL-2株,尽管有病毒血症存在,却不引起胎儿感染;若将该毒株经子宫内接种,可引起胎儿感染,从而导致繁殖障碍。日本学者Fujisakl等将PPV野毒在猪肾细胞上低温(30°C)连续传54代,产生了HT变异株,该毒株接种猪后不产生病毒血症,但能诱导产生高滴度的抗体和较强的免疫力。在此基础上,Akihiro等将HT株在猪肾细胞上培养并用紫外线照射后传代,获得了安全性更好的HT-SK-C株,利用该毒株生产的弱毒疫苗已在日本商品化。我国学者对PPV弱毒苗也进行了研究,蒋玉雯等从广西初产母猪所产死胎脏器中,分离出一株PPV自然弱毒株。用该毒株接种PPV HI抗体阴性的4月龄猪和怀孕14-23天的后备母猪,结果不产生病毒血症,母猪分娩正常,所产小猪吃奶前HI抗体阴性。另外,免疫的怀孕母猪用强毒株攻击后49天剖杀,胎儿发育正常,胎心采血HI抗体阴性,取胎儿脏器进行组织培养也未分离出病毒,而对照猪攻毒后产生了病毒血症并导致繁殖障碍,从胎儿脏器中分离出PPV。尽管已有多株弱毒疫苗在临床上应用,但是由于PPV强毒株的大量存在,人们对病毒重组及弱毒返强的担心一直使弱毒苗的应用受到一定限制。
4.2 灭活疫苗
自1976年国外就有关于PPV灭活疫苗的研究报道,并于80年代在美国、澳大利亚、法国等国家普遍应用。在我国,潘雪珠等研制成功PPV灭活疫苗之后,韩孝成等、肖驰等、邬捷等、吕建强等也先后研制出PPV灭活疫苗。PPV灭活疫苗的研制中,应用的灭活剂有福尔马林、β-丙内酯(β-PL)、AEI(N-乙酰乙烯亚胺)以及BEI(二乙烯亚胺)等。Fujisaki用福尔马林灭活病毒制成的疫苗,免疫动物诱导产生了较高的抗体滴度,但保护效果不理想;潘雪珠比较了福尔马林和AEI的灭活效果,证实AEI优于福尔马林;Joo等用β-丙内酯灭活的疫苗,可使猪产生的抗体至少持续4个月以上。免疫佐剂是影响PPV灭活疫苗效果的重要因素,Moliter等比较了13种不同佐剂用于PPV灭活疫苗的效果,结果发现50%氢氧化铝胶,顺丁烯乙酰(EMA)、CP-20961(Avridin),油水乳剂及dimethyl–dioctadecyl –ammonium bromide (DDA)作佐剂的疫苗,均诱导猪产生了高滴度的抗体,而用油佐剂、SDS、L-121、氢氧化铝和油乳剂混合物、SDS和氢氧化铝混合物作佐剂的疫苗产生的抗体滴度均较低。目前在PPV灭活苗的制备中,经常采用的佐剂是氢氧化铝和油乳剂。
辽宁益康于1998年成功研制了细小病毒油佐剂灭活疫苗。
4.3 新型疫苗
尽管PPV的弱毒苗和灭活苗在猪细小病毒病的预防控制中起到了十分重要的作用,但是各种疫苗均有不同程度的缺陷和不足,如弱毒疫苗发生重组及毒力返强的潜在威胁,以及灭活疫苗免疫效果不稳定等。因此,寻找和发展更为安全有效的疫苗一直是猪细小病毒病免疫预防研究的主题。
4.3.1基因工程亚单位疫苗
Martinez等将PPV VP2基因克隆到杆状病毒表达系统中,并成功地在昆虫细胞中高效表达,表达的VP2多肽能自我装配成类病毒粒子(Virus-Like Particles,VLPs),用其免疫母猪能诱导产生免疫应答。尽管未见有关该种疫苗进一步研究和应用的报导,但是VP2基因在体外表达的蛋白能自我包装成类病毒粒子的特性,为重组多价亚单位疫苗的研究打下了基础。
4.3.2 基因工程多价亚单位疫苗
Sedlik等将PPV VP2和包含淋巴细胞脉络丛脑炎病毒(LCMV)的118-132位氨基酸的抗原决定簇区相连,然后克隆于杆状病毒表达载体PACYM,转染表达PPV:VP2-LCMV蛋白,利用该重组蛋白免疫鼠可以诱导强烈的CTL反应,在体内持续时间长达9个月,并可抵抗致死量的LCMV攻击。之后,Sedlik又将LCMV的CD8+ T细胞抗原决定簇多肽共价结合于1mm的脂质微球上,与上述表达的PPV:VP2-LCMV蛋白一起进行了免疫小鼠的比较,结果发现二者都能诱导产生很强的CD8+ T细胞反应。但是PPV:VP2-LCMV携带的抗原量比脂质体微球少100倍时,诱导的CTL活性仍比脂质体微球诱导的CTL活性高6倍,并且只有PPV:VP2-LCMV免疫的小鼠能抵抗致死量的LCMV的攻击。Richard等用PPV VP2共价结合乙肝病毒HBSAg的抗原决定簇区多肽,然后免疫小鼠诱导产生了很强的针对插入的HBSAg决定簇的T细胞反应,并能抵抗乙肝病毒的致死性攻击。这些结果均说明PPV VP2类病毒粒子,作为一种抗原的转运载体具有很大的潜在价值,并为进行多价重组疫苗的研究创造了良好的条件。
PRV和PPV在临床上经常混合感染的现象已有报导,因此研制出这二种病毒的重组疫苗对生产实践也具有重要意义。
4.3.3 基因疫苗
基因免疫又称核酸免疫,是由Wolff和Felgner于1990年偶然发现的,直接将编码有目的蛋白基因和表达调控序列的DNA或RNA注射到动物机体内,利用机体的转录和翻译系统,合成目的蛋白质,刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。这种能够在体内表达外源蛋白,刺激机体产生免疫应答的核酸称为核酸疫苗,包括DNA和RNA疫苗。理论上认为,迄今所有用于主动免疫的第一、二代疫苗都可完善成效果更加理想的核酸疫苗。赵俊龙等进行了有关PPV核酸疫苗的研究,动物试验初步表明,以PPV结构基因VP1和VP2分别构建的核酸疫苗,均能诱导产生较高水平的体液免疫和细胞免疫,比常规灭活疫苗产生的高。核酸疫苗的生产简便、成本低廉,也预示着其具有理想的应用前景。
5 诊断
用于PPV感染的诊断方法很多,目前应用较多的是HA和HI试验,这两种方法基本能满足常规的病原检测和血清流行病学调查等需要。要得到病原学的确诊,则最好利用病毒分离鉴定方法,这时免疫荧光技术经常成为首选。核酸探针和PCR诊断技术的应用将会越来越广,这两项技术尤其是PCR技术则是所有诊断技术中灵敏度最高的诊断方法。
6 防制措施
本病无特效的治疗方法,应采取综合防制的方法。注意平时的环境卫生,搞好防疫工作,防止本病的传入。无本病的猪场,尽量不从外地引进种猪
被本病污染的猪场,应采取疫苗接种以控制本病的发生。也可在后备种猪群中放入血清阳性的老母猪,或将处女猪放进被感染的猪圈内饲养,使其自然感染而产生自动免疫力。但这种方法使猪场受强毒污染日趋严重。断奶仔猪可隔离到无本病污染的圈舍饲养,以培育健康猪群。 

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